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          牛C-反應蛋白(CRP)ELISA檢測試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
          更新時(shí)間:2024-06-28 點(diǎn)擊量:86

          本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫學(xué)診斷

          BovineC-反應蛋白(CRPELISA檢測試劑盒

          使用說(shuō)明書(shū)

          檢測原理

          試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被C-反應蛋白(CRP抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C-反應蛋白(CRP呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

          樣品收集、處理及保存方法

          1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

          2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

          3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

          4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

          5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

          自備物品

          1. 酶標儀(450nm)

          2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

          3. 37℃恒溫箱

          操作注意事項

          1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

          2.  實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

          3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

          4.  嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

          5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

          試劑盒組成

          名稱(chēng)

          96孔配置

          48孔配置

          備注

          微孔酶標板

          12孔×8條

          12孔×4條

          無(wú)

          標準品

          0.3mL*6管

          0.3mL*6管

          無(wú)

          樣本稀釋液

          6mL

          3mL

          無(wú)

          檢測抗體-HRP

          10mL

          5mL

          無(wú)

          20×洗滌緩沖液

          25mL

          15mL

          按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

          底物A

          6mL

          3mL

          無(wú)

          底物B

          6mL

          3mL

          無(wú)

          終止液

          6mL

          3mL

          無(wú)

          封板膜

          2張

          2張

          無(wú)

          說(shuō)明書(shū)

          1份

          1份

          無(wú)

          自封袋

          1個(gè)

          1個(gè)

          無(wú)

          注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、0.75、1.5、3、6、12 mg/L

          試劑的準備

          20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

          洗板方法

          1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

          2.  自動(dòng)洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

          操作步驟

          1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

          2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

          3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

          4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

          5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

          6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

          7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

          結果判斷

          繪制標準曲線(xiàn):在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),按曲線(xiàn)方程計算各樣本濃度值。

          牛C-反應蛋白(CRP)ELISA檢測試劑盒使用說(shuō)明書(shū)


          試劑盒性能

          1. 準確性:標準品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值,大于等于0.9900。

          2. 靈敏度:最DI檢測濃度小于0.1 mg/L。

          3. 特異性:不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。

          4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

          5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

          6. 有效期:6個(gè)月

          2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫學(xué)實(shí)驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!

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